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HPLC溶劑乙腈和甲醇的關(guān)鍵區(qū)別和性能
乙腈(ACN)和甲醇(MeOH)是在反向色譜柱方法開發(fā)中廣泛使用的兩種常見溶劑。所以，除了知道乙腈比甲醇有更高的洗脫能力這一事實外，還有一些其他特性。
首先，對流動相溶液的準備提出幾點意見。
只有純水溶液部分才能正確調(diào)整pH值。不要嘗試測量或調(diào)整有機或有機混合物的pH值。
制備二元混合物的方法有兩種，即V/V流動相溶液。
方法#1是用特定體積的“A”溶液填充一個量瓶，然后用“B”溶液將量瓶填滿。
方法#2是用數(shù)量的“A”溶液填充量筒(或容量瓶);用數(shù)量的“B”溶液填充第二個量筒(或容量瓶)，然后將兩者的內(nèi)容混合在一起。
無論您使用哪種方法，請在您的液相色譜法中完整地記錄它，以便任何閱讀它的人都能準確地復制它。上面描述的兩種方法在設(shè)計上都是正確的，但是會產(chǎn)生不同性質(zhì)的結(jié)果。
紫外線吸光度
對于HPLC級溶劑(*我們在HPLC分析中應(yīng)始終使用HPLC級溶液)，乙腈的吸光度(~ 190nm)在這兩種溶劑中低，非常適合低紫外光分析。甲醇在205-210nm左右有較高的紫外光截止值，在非常低的紫外光范圍內(nèi)略有限制。
溶劑溶解性
乙腈和甲醇在溶解多種緩沖鹽和樣品的能力上存在顯著差異。這些差異在方法開發(fā)中至關(guān)重要。
流動相溶解度
梯度運行顯示低重現(xiàn)性或失敗的一個常見原因可能與運行高濃度緩沖液和高濃度有機溶液有關(guān)。而含有濃度小于10mM鹽溶液的水溶液/有機溶液在大多數(shù)梯度條件下不太可能沉淀(多98%是有機溶劑，而不是100%)，大多數(shù)與液相色譜應(yīng)用一起使用的緩沖溶液會有更高的鹽濃度，當分析條件中有機溶劑含量較高時可能會從溶液中析出(導致堵塞，泄漏，插頭和不準確的結(jié)果)。在反向色譜法中選擇有機組成時要謹慎。確保使用的溶液在所有濃度下都是穩(wěn)定的。還要驗證緩沖能力是否仍然存在，當使用高有機濃度時(當緩沖液被稀釋時)。
不確定鹽是否會溶解?只要把同樣濃度的溶劑混合起來做測試就行了。觀察它，有任何渾濁或可見顆粒嗎?你就可以得到你需要的答案。
甲醇總體上具有更好的溶解度特性(優(yōu)于乙腈)，這意味著它在較高濃度下能更好地溶解大多數(shù)鹽(尤其是NH4, K和Na)，從而獲得更好的性能和更少的沉淀。
樣品的溶解度(對峰形和保留的影響)
液相色譜的一個基本要求是樣品*溶解在流動相(初始流動相)中。在分析前，將樣品溶解在流動相或強度稍弱的溶液(不是更強的溶液)。這確保它將作為一個集中的段塞加載到柱的頂部，以改善峰形和RSD。如果樣品沒有*溶解在流動相，那么你實際上并沒有分析整個樣品。甲醇優(yōu)于乙腈的另一個方面是它能*溶解更多類型的樣品。這一改進的溶解度可能導致更好的整體峰形。甲醇的選擇性也不同于乙腈(不僅僅是洗脫強度)，這可能導致峰洗脫時間與預(yù)期的保留時間不同。這也是為什么在開發(fā)反向方法時，我們總是嘗試使用含有乙腈或甲醇的不同流動相混合物的另一個原因。
永遠不要假設(shè)一種溶劑會比另一種溶劑更好。太多的色譜新手只使用乙腈作為他們方法開發(fā)的主要有機溶劑。請不要犯他們的錯誤，這樣的策略表明缺乏實踐經(jīng)驗和知識。您必須首先分別嘗試它們(乙腈&甲醇)用你的樣品來評估結(jié)果(在適用的情況下從不同pH值的全面梯度開始)。如果您在初的時間內(nèi)測試了這兩種類型的溶劑，那么您將獲得回報，因為還沒有開發(fā)出能夠使用您自己的樣品來預(yù)測真正準確的結(jié)果的模擬器。您可能會驚訝地發(fā)現(xiàn)，有多少樣品使用甲醇溶液顯示出更好的峰形和性能。如果沒有看到任何改善，至少你現(xiàn)在知道了，因為你已經(jīng)嘗試過了，并且可以滿懷信心地前進。
背壓
乙腈的粘性比甲醇小，因此通常會導致整體柱壓和系統(tǒng)背壓降低。乙腈和水的混合物也會發(fā)生吸熱反應(yīng)(冷卻溶液)，從而在溶液中捕獲氣體。如果你預(yù)先混合你的流動相，讓它靜置幾分鐘后在制備。
甲醇比乙腈更粘稠。它還有一個不尋常的特性，就是甲醇和水的50/50混合物會產(chǎn)生一個比甲醇或水更高的系統(tǒng)和柱背壓。其效果是非常高斯的，它的峰值壓力是由50/50的混合物所觀察到的。兩種溶液在開始混合釋放出一些氣體也會產(chǎn)生放熱反應(yīng)。在制備溶液時，是讓溶液靜置幾分鐘，然后在高壓液相色譜系統(tǒng)中使用。
希望這篇關(guān)于這兩種常用液相色譜溶劑的差異的簡短討論將有助于您開發(fā)出更好的液相色譜和LC-MS方法。
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